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通用 SP 試劑盒

通用 SP 試劑盒

品牌:北京中杉

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    存儲條件:2~8℃暗處保存。

    檢驗原理:生物素標記的山羊抗小鼠/兔IgG聚合物與結合在組織片上的一抗反應形成免疫復合物,辣根酶標記鏈霉卵白素與生物素免疫復合物結合進一步形成聚合物,聚合物上的辣根酶(HRP)催化顯色底物(DAB或AEC)形成不溶性色原,從而在顯微鏡下顯示出組織片中的特定抗原的位點。

    試劑盒內容:

    包裝規格:3mL6mL18mL55mL110mL
    試劑1:內源性過氧化物酶阻斷劑3mL6mL18mL55mL110mL
    試劑2:封閉用正常山羊血清工作液3mL6mL18mL55mL110mL
    試劑3:生物素標記山羊抗小鼠/兔IgG聚合物3mL6mL18mL55mL110mL
    試劑4:辣根酶標記鏈霉卵白素工作液3mL6mL18mL55mL110mL

    檢驗方法:

    1、檢驗所需儀器、設備:移液器、恒溫箱、修復儀、免疫組化筆、計時器、孵育盒、染色架、蓋玻片、光學顯微鏡、洗瓶。

    2、試劑準備:DAB顯色液需要在使用前配制。 

    3、操作程序: 

    a) 脫蠟和水化

    石蠟切片置于新鮮二甲苯中,浸泡10分鐘×3次;去除多余的液體后,置于無水乙醇中,浸泡3分鐘×3次;去除多余的液體后,置于95%乙醇中,浸泡3分鐘×2次;去除多余的液體后,置于75%乙醇中,浸泡3分鐘×2次;蒸餾水沖洗1分鐘,置于PBS緩沖液中。

    b) 抗原修復,參見一抗說明書。

    c) 阻斷內源性過氧化物酶

    加入適量的內源性過氧化物酶阻斷劑,室溫孵育10分鐘;PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。

    d) 滴加封閉用正常山羊血清工作液

    滴加100μL或適量的封閉用正常山羊血清工作液,室溫孵育10~15分鐘,傾去血清,勿洗。

    e) 滴加一抗

    根據組織大小,滴加100μL或適量的一抗,37℃孵育60分鐘;PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。

    f) 滴加生物素標記山羊抗小鼠/兔IgG聚合物

    滴加100μL或適量的生物素標記山羊抗小鼠/兔IgG聚合物,室溫孵育10~15分鐘;PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。

    g) 滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液

    滴加100μL或適量的辣根酶標記鏈霉卵白素工作液,室溫孵育10~15分鐘;PBS緩沖液沖洗3分鐘×3次。

    h) 顯色

    加入適量新鮮配制的DAB或AEC顯色液,室溫孵育5~8分鐘。

    i) 復染

    自來水沖洗,蘇木素染色液孵育20秒;分化、沖洗返藍。

    j) 脫水、透明、封片

    k) 閱片。

    4、結果判定,染色結果須由有資質的病理醫生對染色后的組織片在光學顯微鏡下觀察并進行判讀。

    檢驗結果的解釋:1、抗原修復、孵育時間、溫度的修改或使用其他方法均有可能得出錯誤結果。

    2、在每一次染色過程中,必須有空白對照和陰性對照實驗同時進行。

    3、如果陽性組織對照不能顯示適當的陽性染色,應判定該批次樣本的檢測結果無效。

    4、若生物素標記山羊抗小鼠/兔IgG聚合物和辣根酶標記鏈霉卵白素工作液孵育溫度過高或孵育時間過長,可能導致染色過強及背景染色。

    檢驗方法的局限性:1、免疫組織化學染色是一種需通過多個操作步驟完成的檢測過程。在組織前期處理和實驗過程中的不規范操作,有可能影響實驗結果。

    2、專業的操作人員、經過認證的實驗室和標準化的實驗流程,可以減少各種外界因素造成的操作偏差。

    3、紅細胞和細胞色素 C可能會造成假陽性結果。

    4、某些組織中內源性生物素含量比較高,可能導致染色過強及背景染色。

    5、陰性結果表示未檢出抗原,不一定表示樣本中無該抗原存在。待測抗原編碼基因變異、抗原低表達或抗原修復不當等,都會造成抗原無法檢出。

    6、本試劑僅對10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋的組織進行了驗證,不作其他用途。

    產品性能指標:1、裝量:試劑盒各組份的溶液裝量應不少于標示裝量。

    2、符合性:取符合性組織片(包括陽性組織對照和陰性組織對照),經相應的免疫組化實驗后,應陽性著色定位準確,且無背景染色;同時,空白對照和陰性對照染色結果為陰性。

    3、批內重復性:取同一批次的試劑盒,檢測組織片3片,染色強度和定位無明顯差異。

    標本染色:1. 石蠟切片,常規脫蠟至水。

    2. 如需采用抗原修復,在此步驟后進行。

    3. 3% H2O2去離子水(無色液體)孵育5~10分鐘,以消除內源性過氧化物酶活性。PBS沖洗,3分鐘×3次。

    4. 滴加試劑A(藍色液體)室溫孵育10~15分鐘,傾去,勿洗。

    5. 滴加適當比例稀釋的一抗,37℃孵育2~3小時或4℃過夜。

    6. PBS沖洗,3分鐘×3次。

    7. 滴加試劑B(黃色液體)室溫或37℃孵育10~15分鐘。

    8. PBS沖洗,3分鐘×3次。

    9. 滴加試劑C(橙色液體),室溫或37℃孵育10~15分鐘。

    10. PBS沖洗,3分鐘×3次。

    11. 顯色劑顯色(DAB或AEC)。

    12. 自來水充分沖洗。

    13. 如果需要,可進行復染,脫水,透明。

    14. 選擇適當的封片劑封片。


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